5.长可以合成多长的引物?
答:引物越长,出现问题的概率就越大。有的公司合成过120base的引物,产率很低。除非需要,建议合成片段长度不要**过80mer,按照目前的引物合成效率,80mer的粗产品,全长(还不一定正确)引物的百分比不会**过40%,后续处理还有丢失很多,的产量很低。
6.需要合成多少OD数?
答:根据实验目的确定。一般PCR扩增,2 OD引物,fish检测,可以做200-500次50ul标准PCR反应。如果是做基因拼接或退火后做连接,PCR实验室,1 OD就足够了。但是有些研究人员,就做几次PCR,但是却要5-10 OD。做全基因构建的引物都比较长,但是我们有些研究人员也要求高OD数。片段越长, 全长得率就越低,出错的几率就越大。**出需要之外的OD数要求,其实也是对社会资源的一种浪费,汉中pcr,同时也从一个侧面反映了部分研究人员特别是新手的自信心不足,总觉得需要重复多次才能成功。
RNA提取及注意事项
研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低经常影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。
主要试剂
Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫酸胍等物质,能*破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。
1.
Trizol试剂含有,具有毒性和刺激性,注重操作。
2.
RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉,注重配带手套,样品尽可能盖严。
3. 细胞裂解必需充分且操作*。裂解不完全会降低后得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除外)。在清洗和裂解细胞时在低温下操作,防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。
4. 酵母和一些细菌由于细胞壁的特别结构,可以加入Trizol试剂同时加入无RNase的玻璃珠并剧烈振荡,使细胞裂解充分。
2-8℃ 避光保存一年。
LncRNA芯片
Long non-coding RNAs(lncRNAs)是一类转录本长度**过200 nt的功能性非编码RNA分子。目前的研究已证实,lncRNA参与X染色体沉默,基因组印记以及染色质修饰,转录ji活,转录干扰,核内运输等多种重要调控过程。随着对lncRNA在哺乳动物进化及人类疾病发生和发展中作用的日益关注,lncRNA调控机制已成为当前遗传学研究的热点问题。
筛选出差异表达的lncRNA是研究其在人类疾病发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncRNA芯片进行lncRNA表达谱分析,该芯片基于Agilent的SurePrint技术生产,实验。
技术优势
信息覆盖广泛:覆盖了多个quan威lncRNA数据库发布的数据;提供人,小鼠,大鼠的lncRNA检测。
lncRNA和mRNA同时检测:芯片上包含有的lncRNA和新的mRNA序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncRNA和mRNA进行分析。
平台成熟可靠:采用Agilent原位喷墨合成技术,了高检测灵敏度和特异性。
数据分析:提供lncRNA和mRNA表达谱差异分析和功能分析,以及二者的关联分析。